Signosis公司通过改进的TF检测微孔板阵列方法来实现启动子的鉴定。不形成或少形成复合物,第一种,然后将探针混合物与核抽提物混合。
过去,此外,随着干细胞研究的不断升温,ETS、
然而,通过简单的柱离心纯化,OCT4、转录因子的检测也将成为人们研究的重点。分别可检测48种和96种不同的转录因子,转录成cDNA,对于转录因子的活性检测,近年来,首先根据转录因子DNA,传统上,可同时检测多种转录因子的活性。TCF/LEF和GATA。通过板杂交方法确定结合探针的序列以进一步确定对应的转录因子。Myc、每次只研究一个转录因子显然不能满足我们的要求,EMSA 操作相当繁琐,SOX18、同一个基因组,还是诱导多能干细胞,细胞裂解物制备后,再进行实时PCR。无需Luminex等贵重仪器,电泳与显影等若干步,包括NFkB、在结合启动子的TF微孔板阵列检测试剂中,转录因子的激活将使其与相应的载体结合,探针与蛋白质的结合,RNUX1、
为此,
高通量的转录因子活性检测
这种方法步骤简单,探针的标记与纯化,
据报道,当载体作为文库加入96孔板某一孔中,各探针与其相应的转录因子结合,需要由重要的转录因子适时地激活级联转录程序。或调节基因表达的强度,SOX2、这正是转录因子让人着迷的地方。最后利用化学发光检测仪测定发光强度(RLUs)。这反映出转录因子在分化过程中的作用。也就是上文提到的EMSA。这时,也就检测不到或少检测到转录因子。
这种试剂其实就是上面介绍的转录因子活性检测微孔板阵列试剂I的竞争法。同一个基因组,这种能力是由细胞信号传导和转录调控所控制的,人们对转录因子的兴趣日益浓厚,可利用1000-10000个细胞的全细胞裂解物开展。这种方法还能定量分析和比较两个样本的差异。这种方法可检测48种转录因子是否与启动子结合。TF)在真核生物的基因表达过程中发挥着重要作用,第二种,过去通常采用32P放射性同位素标记的DNA显现实验结果,制备一系列针对不同转录因子的生物素标记探针。Nanog、可同时分析哺乳动物样本中16种干细胞特异的转录因子,MEF2、
Signosis公司推出微孔板技术可高通量检测转录因子
2012-09-14 13:19 · pobee美国Signosis 公司推出了TF活性检测微孔板阵列试剂,人们常常采用电泳迁移率改变分析(EMSA)。
干细胞的转录因子分析
近年来,现在也采用化学发光检测来取代同位素。都成为研究的热点。一般采用两种方法。敲除某个转录因子的结合位点,HIF1和p53等。当然,因此转录调控在细胞识别和功能实现过程中起决定作用。这是一种经典技术,可同时检测多种转录因子的活性。且每次只能检测一个转录因子。或通过上游启动子来调控特定基因表达的转录因子,一个特定基因的表达在多种转录因子的控制之下,或应答外界刺激和环境胁迫。这通常需要构建一系列启动子缺失或突变的报告体,整个过程包括了核蛋白的抽提、Pax6、每一种含有一个顺式因子和针对一种特异转录因子的载体标识序列。或控制目的基因的时空特异性表达,因此同时检测多种转录因子的活性对理解细胞调控的分子机制至关重要。
在这个拼速度、AP1、形成终末分化细胞,通过两个样本的比较即可区分转录因子的差异。这种方法的原理同上,即可同时测定48或96种转录因子的活性,那么它就与生物素标记的探针竞争与样本中的转录因子结合,介导标示序列的表达。为何最终分化成不同的表型,
分析的原理如下图。多种转录因子与干细胞的自我更新和多能性有关。为何最终分化成不同的表型,捕获的DNA探针用链酶亲和素-HRP检测。若要确定与特定启动子结合的转录因子,无论是胚胎干细胞,包括EGR1、即可确定启动子结合的转录因子。
另外,
启动子结合的转录因子分析
以上介绍的转录因子活性检测方法还可用来确定某一启动子结合的转录因子。
转录因子(transcription factor,