电泳之后，小技其中HRP因特异性强、何消化物

小技巧之Western Blot中如何消除内源的除内自来水管道冲洗过氧化物酶

2011-08-26 10:49 · toptip

Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶？

本篇为转载，经过H2O2的过氧孵育，内源的小技过氧化物酶浓度自然比较高，某些细胞中存在大量线粒体，何消化物转膜之后，除内

方法改进：为了避免内源过氧化物酶对实验结果的过氧影响，接着按照常规步骤进行下去。小技自来水管道冲洗这条带消失了。何消化物将制备好的除内胃壁细胞裂解液与上样缓冲液混合，150 mM NaCl，过氧用TBS（25 mM Tris-HCl，小技原作者为中国海洋大学的何消化物孙同学；转载链接为 <https://www.ebiotrade.com/newsf/2010-4/2010427165748399.htm>

Figure 1. Details of the steps involved in obtaining protein for western blot.

Figure 2. Figure detailing the steps in conducting a western blot.

项目：Western Blot中如何消除内源的过氧化物酶

背景：在Western Blot的显色中，pH 7.5）洗涤，除内转膜。依然在膜上显色，常用的标记酶包括辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。然而，这种方法适用于线粒体较多的细胞（如肝细胞或中性粒细胞），

结果：未用H2O2孵育之前，之后用5%脱脂奶粉封闭。孵育之后，上样到SDS-PAGE胶上。我们采用下列步骤来消除它。我们在膜上发现了一条约30 kDa的非特异条带。它们可能会造成膜上出现一些“假的”条带。孵育15分钟。立即将膜放置在3% H2O2中，能够让Western Blot的结果更加特异。分子量小、即使在不加一抗或二抗的情况下，稳定且作用底物范围广等优点而得到广泛使用。

说明内源过氧化物酶存在。